ミラノ公ルドヴィーコ・スフォルツァは、最後の晩餐をサンタ・マリア・デッラ・グラツィエ修道院の食堂のために依頼しました。この作品は、イエスが十字架にかけられる前に弟子たちと共有した最後の食事の有名な聖書の物語を描いており、具体的にはイエスが自分たちのうちの1人が彼を裏切るだろうと伝えた後の瞬間を描いています。使徒たちはそれぞれ困惑や不信の表情で個別に描かれており、裏で裏切りに対価として受け取った銀貨が入った袋を握りしめるユダが立っています（レオナルドは牢獄から犯罪者をスタジオに連れてきてユダのモデルとして使う許可を得ました）。イエスは中央に位置し、ユダが裏切りのために受け取った銀貨を持つ影で手を伸ばしてパンとワインに触れています。彼の背後には窓を通して見える理想化された風景が広がっており、天国の楽園を暗示しているかもしれず、三つの窓は聖三位一体を意味している可能性があります。
複雑なディテールと一点透視法の使用により、イエスが絵画空間の中心に位置し、他の要素が放射する形で配置されることで、ハイルネサンス美術の新たな方向性を示しました。さらに、透視点の技法は絵画の位置と設定と調和し、作品を修道院の食堂の自然な延長のように見せることを可能にしました。美術史家E・H・ゴンブリッチは、完成した絵画について「この作品には、同じテーマの従来の描写とは異なる要素は何もありませんでした。従来のバージョンでは、使徒たちは静かにテーブルに座っているのが見られ、ユダだけが他の人々から隔離されていました。一方、キリストは穏やかに聖体を分配していました。この絵画にはドラマがあり、興奮がありました。レオナルドは、ジョットの前に聖書の文章
に戻り、キリストが言ったであろう瞬間を視覚化しようと努力しました。『まことにあなたがたに告げます、あなたがたのうちのひとりが私を裏切るであろう』」と述べています。
このタイプのフレスコ画に通常使用される水性絵具はレオナルドのスフォマート（煙りを帯びた）技法には適さなかったため、彼は代わりに油性絵具を選びました。しかし、油彩と漆喰の組み合わせは壁から剥がれ落ちるという壊滅的な結果となりました（修道院のキッチンから発生する蒸気と煙も状況を悪化させました）。現在、レオナルドのオリジナルの絵画はほとんど残っておらず、最後の修復が1999年に完了し、約21年かかりました。美術史家のカヤティ・ラジヴァンシは、フレスコ画が現在厳格な温度管理下の環境に置かれていることを説明しています。ラジヴァンシは「修道院の最後の晩餐を訪れる人は1日にわずか1,300人であり、各人が傑作を楽しむための最大の時間は15分です（そして、それによるダメージをさらに引き起こさないように過度な埃を残さないようにします）」と述べています。
フレスコ画 – サンタ・マリア・デッラ・グラツィエ修道院、ミラノ、イタリア
